外泌体指标鉴定实验

一、实验原理

所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。 有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的分子机制刚刚开始研究。 外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。

外泌体（Exosome）主要检测指标为CD63、CD9、CD81、Tsg101、Alix、HSP70等，针对外泌体的定性检测，至少选择2-3个指标就能满足文章发表就可以。大部分文献中没有检测内参，个别文章中使用了Actin、GAPDH和Tubulin作为内参进行检测，外泌体中的Actin、GAPDH和Tubulin的表达丰度相对于正常细胞样品中的较低，可能会检测不到任何条带或者条带微弱。

二、实验流程

1. 外泌体BCA法定量。

2. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳（SDS-PAGE）。

3. 蛋白质转移到PVDF膜。

4. 膜的封闭和抗体孵育。

5. 结果检测。